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三级片美女大胸

时间:2020-11-27 02:41  编辑:wendj

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548石油学报(石油加工)第26卷

微生物物种资源极其丰富,是地球上仅次于昆虫的第2大类群生物。微生物多样性的研究是整个生物多样性研究的重要组成部分[1]。人们可以通过对土壤微生物群落的结构和多样性进行解析,并研究其动态变化和纵向分布,优化群落结构,调节群落功能,发现新的重要微生物功能类群,为污染土壤生物修复提供可靠的依据[2]。虽然国内外的研究人员对石油污染土壤生物修复进行了大量的基础性研究工作,筛选出了能够较好地降解石油烃的菌株,也构建了较为完善的环境条件优化体系,但是这些研究工作都是在微生物传统培养分离方法的基础上开展的。由于目前能够被培养的细菌相当少[3],通过传统培养分离方法进行含油污泥生物处理所获取的优势降解菌有可能并非原生境中的优势高效降解菌,不能直观地反映石油污染土壤优势菌群分布情况,也无法有效地针对特定优势菌群进行环境条件的调控,从而限制了石油污染土壤生物修复技术的应用。在本研究中,笔者结合传统培养分离方法和现代分子生物学方法,探讨了油田某区块石油污染土壤中生物群落的结构和多样性。

1实验部分

1.1污染土壤样品的采集

土样A1和A2样品分别为被石油烃污染多年的油泥沙和钻井产生的落地原油新污染土壤。B1、B2和B3为某污水处理厂含油污泥经堆肥处理过的现场剖面土样,采样深度分别为25~35cm、15~ 25cm和5~15cm。

1.2材料与试剂

牛肉膏蛋白胨培养基;细菌基因组DNA提取试剂盒(TIANamp Bacteria DNA Kit);基因组DNA琼脂糖电泳Marker(Lambda DNA/EcoRI+ HindIII Marker,3);PCR产物琼脂糖电泳Marker (GeneRulerTM100bp DNA Ladder Plus);DNA loading buffer染料;核酸染料溴化乙锭(EB);PCR 扩增成套体系;荧光染料(SYBR Green I)。

1.3细菌基因组DNA的提取

分别收集5个土样在牛肉膏蛋白胨培养基培养36h的所有新鲜菌苔,利用细菌基因组DNA提取试剂盒提取培养基样品的总DNA。同时采用玻璃珠击打n]和差速离心的方法收集石油污染土壤中的菌体,然后通过细菌基因组DNA提取试剂盒提取其总DNA。1.4细菌基因组DNA的PCR扩增

以细菌基因组DNA提取试剂盒提取到的10个细菌基因组DNA样品作为PCR模板,使用对细菌V3区有特异性的通用引物拍],扩增产物的片段长度为200bp。

PCR(Polymerase chain reaction)体系的总体积为25pL,包括16.5pL的ddH20,2.5弘L10×PCR buffer,2弘L MgCl2,2pL dNTP,0.4ttL P2,0.4pL P3,0.2弘L Tag酶以及1pL的模板。扩增采用TouchDown PCR(降落PCR)[6]。

1.5细菌基因组DNA的“Rec帅ditioning PCR”

为了消除普通PCR过程中的单链DNA和杂合双链DNA污染,需要对扩增产物再经过1次“Reconditioning PCR”以及聚丙烯酰胺凝胶电泳口]。

1.6PCR产物的DGGE分析

采用Bio—RAD公司DecodeTM基因突变检测系统,对扩增的10个PCR反应产物进行变性梯度凝胶电泳(Denaturing gradient gel electrophoresis, DGGE)分离[8]。

2结果与讨论

2.1微生物群落多样性分析

对5个样品从培养基与土样中获取的DNA,通过PCR扩增,并进行DGGE分析,结果如图1所示。

图l5种细菌培养基样品和相应土壤样品的IRY,GE

分离谱图及其模式图

Fig.1The DGGE band patterns and models of five

cultured and soil samples

Lane a_e:The cultured samples of A1,A2,B3,132and B1I Lalie f-j:The soil samples of A1,A2,133,B2and B1

(a)DGGE band pattern:(b)DGGE band

model

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PCR-DGGE技术用于石油污染土壤中微生物群落结构多样性的

初步研究

作者:吴伟林, 张秀霞, 单宝来, 张剑杰, 赵朝成, WU Weilin, ZHANG Xiuxia, SHAN Baolai, ZHANG Jianjie, ZHAO Chaocheng

作者单位:中国石油大学,环境科学与工程系,山东,青岛,266555

刊名:

石油学报(石油加工)

英文刊名:ACTA PETROLEI SINICA(PETROLEUM PROCESSING SECTION)

年,卷(期):2010,26(4)

被引用次数:4次

参考文献(10条)

1.AMANN R I;LUDWIG E;SCHLEIFER K H Phylogenetic identification and in situ detection of individual microbial cells without cultivation[外文期刊] 1995(01)

2.车玉伶;王慧;胡洪营微生物群落结构和多样性解析技术研究进展[期刊论文]-生态环境 2005(01)

3.章家恩;蔡燕飞;高爱霞土壤微生物多样性实验研究方法概述[期刊论文]-土壤 2004(04)

4.张秀敏;徐金娥;王海祥从土壤样品中提取和纯化微生物DNA方法研究进展[期刊论文]-保定师范专科学校学报2005(02)

5.MUYZER G;DE WAAL E C;UITTERLINDEN A G Profiling of complex microbial populations by denaturing gel electrophoresis analysis of polymerase chain reactionamplified genes coding for 165 rRNA 1993(03)

6.SIL VESTRI G;SANTARELLI S;AQUILANTI L Investigation of the microbial ecology of Ciauscolo,a traditional Italian salami,by culturedependent techniques and PCR-DGGE[外文期刊] 2007(03)

7.THOMPSON J R;MARCELINO L A;POLZ M F Heteroduplexes in mixed-template

amplifications:Formation,consequence and elimination by 'reconditioning PCR'[外文期刊] 2002(09)

8.罗海峰;齐鸿雁;薛凯PCR-DGGE技术在农田土壤微生物多样性研究中的应用[期刊论文]-生态学报 2003(08)

9.卢莉琼;徐亚同;梁俊分子生物学技术在微生物多样样及微生物生态研究中的应用[期刊论文]-应用与环境生物学报 2004(06)

10.杨维康;张道远;尹林克新疆柽柳属植物(Tamarix L)的分布与群落相似性聚类分析[期刊论文]-干旱区研究2002(03)

本文读者也读过(6条)

1.罗海峰.齐鸿雁.薛凯.张洪勋PCR-DGGE技术在农田土壤微生物多样性研究中的应用[期刊论文]-生态学报2003,23(8)

2.孙宝盛.张斌.吴卿.金敏.SUN Bao-sheng.ZHANG Bin.WU Qing.JIN Min应用PCR-DGGE技术解析MBR中微生物群落多样性[期刊论文]-天津大学学报2008,41(3)

3.苏俊峰.马放.赵立军.魏利.李维国.侯宁.SU Jun-feng.MA Fang.ZHAO Li-jun.WEI Li.LI Wei-guo.HOU Ning石化废水处理系统微生物群落结构PCR-DGGE分析[期刊论文]-南京理工大学学报(自然科学版)2008,32(1)

4.潘雪莲.黄晟.方昊.徐军.郭晓峰.陈旸.崔益斌.PAN Xue-lian.HUANG Sheng.FANG Hao.XU Jun.GUO Xiao-feng. CHEN Yang.CUI Yi-bin黄土高原土壤中细菌群落结构多样性的PCR-DGGE分析[期刊论文]-生态与农村环境学报2009,25(3)

5.马悦欣.Carola Holmstrom.Jeremy Webb.Staffan Kjelleberg变性梯度凝胶电泳(DGGE)在微生物生态学中的应用[期刊论文]-生态学报2003,23(8)

6.刘敏.王子峰.朱开玲.李洪波.高绪敏.邓兵.肖天.Liu Min.Wang Zifeng.Zhu Kailing.Li Hongbo.Gao Xumin.

Deng Bing.Xiao Tian应用PCR-DGGE技术分析长江口低氧区的细菌群落组成[期刊论文]-高技术通讯2008,18(6)

引证文献(4条)

1.刘春爽.张云波.赵东风.赵朝成.刘其友响应曲面法优化混合菌KW8-2修复石油污染土壤[期刊论文]-中国石油大学学报(自然科学版) 2011(6)

2.王慧.宋智勇.郝滨.刘涛.高光军.郭省学.汪卫东微生物驱产出液群落结构与现场生产动态的关系[期刊论文]-石油学报 2013(3)

3.唐玉林DGGE技术在环境微生物多样性研究中的应用[期刊论文]-中国科技信息 2013(23)

4.覃德文.云朝光.秦武明.秦玉.韦丙俭PCR技术发展状况研究[期刊论文]-林业实用技术 2013(6)

本文链接:http://d.wanfangdata.com.cn/Periodical_syxb-syjg201004010.aspx

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